定义 将目的基因与运载体结合，构建能复制、表达并稳定遗传的重组DNA分子的过程。
从哪来 它建立在“基因表达载体的定义”这一前置知识之上，明确了构建对象的核心属性。
为什么 目的基因单独进入受体细胞后，既无法自主复制（缺乏复制原点），也无法被转录翻译（缺乏启动子、终止子等调控元件），且难以筛选。构建载体是为了解决“复制、表达、筛选”三大难题，使基因能在受体细胞中稳定存在并发挥作用。
讲法
类比法：装修房子
适合
形象思维强、抽象概念理解困难的学生。
把受体细胞比作“毛坯房”，目的基因比作“家具”。直接搬家具进去（直接导入目的基因），家具会坏（基因丢失），也没法用（无法表达）。构建载体就是给家具配个“专用底座和说明书”（启动子、终止子、标记基因），并装上“搬运车”（运载体），这样家具才能稳固摆放且正常使用。
讲法
逻辑推导法：功能缺失分析
适合
逻辑思维强、喜欢探究原理的学生。
提问：如果只把目的基因切下来导入细菌，会发生什么？
1. 细菌分裂时，没有复制原点的基因片段会被丢弃 -> 无法稳定遗传。
2. 细菌RNA聚合酶不认识裸DNA，无法启动转录 -> 无法表达。
3. 怎么知道哪些细菌导入了？ -> 无法筛选。
结论：必须构建载体，补齐复制原点、启动子/终止子、标记基因。
讲法
工程流程法：组装乐高
适合
动手能力强、偏好步骤化学习的学生。
将构建过程拆解为四个标准步骤：
1. 选零件：选运载体（质粒等）和目的基因。
2. 切接口：用同种限制酶切割，产生相同黏性末端。
3. 粘起来：用DNA连接酶连接磷酸二酯键。
4. 验成品：检查是否含有启动子、终止子、标记基因、复制原点。