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4. 扩大培养

微生物发酵工程及其应用 · 高二
先确认一下:这一关能不能学
上面这几节是它的地基 —— 没通的话,补完再回来,比硬啃快得多。
讲清楚它是什么

定义 指在微生物培养过程中,通过改变环境条件或添加特定物质,使菌体数量或代谢产物产量显著增加的过程。

从哪来 建立在“1. 碳的存在形式”和“1. 氮的存在形式”之上。理解微生物如何利用不同形式的碳源(如葡萄糖、CO2)和氮源(如铵盐、硝酸盐)合成自身物质,是理解如何通过调整这些营养供给来“扩大”培养规模的基础。

为什么 微生物生长受限于营养物质的种类、浓度及环境因子(pH、温度、溶解氧)。 1. 碳源驱动:碳是细胞骨架和能量的主要来源。若碳源形式(如从无机碳转为易利用的有机碳)或浓度优化,代谢速率加快,生物量增加。 2. 氮源驱动:氮是蛋白质和核酸的关键成分。提供高效氮源(如从难利用的有机氮转为铵态氮)能直接提升合成代谢效率。 3. 协同效应:扩大培养本质是解除“限制因子”。通过匹配微生物最适的C/N比及存在形式,最大化其生长速率(μ),从而实现种群数量的指数级扩增。

讲法
类比法:餐厅扩容 适合形象思维强、抽象逻辑较弱的学生。 将微生物比作食客,碳源和氮源比作食物。 - 初始培养:小碗饭,吃得慢,人少。 - 扩大培养:换成大锅饭(增加碳源浓度),且把粗粮换成精米(优化碳的存在形式,如葡萄糖比纤维素更易利用),食客吃得快、长得壮,餐厅里的人(菌体)就多了。 - 强调:不是随便加饭,要加“对”的饭(合适形式的C/N源),否则消化不良(代谢废物积累)反而死得快。
讲法
数学模型法:指数增长 适合逻辑思维强、擅长数据分析的学生。 引入公式 $N_t = N_0 e^{\mu t}$。 - 解释:扩大培养的核心目标是提高 $\mu$(比生长速率)。 - 推导:$\mu$ 受限于底物浓度 $S$(Monod方程 $\mu = \mu_{max} \frac{S}{K_s + S}$)。 - 结论:通过提供高浓度、易吸收形式的碳(C)和氮(N),使 $S$ 远大于 $K_s$,从而让 $\mu$ 接近 $\mu_{max}$,实现 $N_t$ 的快速扩大。 - 重点:区分“碳的存在形式”如何影响 $K_s$(亲和力),例如葡萄糖的 $K_s$ 通常低于木质素,因此用葡萄糖扩大培养效率更高。
工业流程法:种子罐与发酵罐** 适合**动手能力强、关注实际应用**的学生。 展示工业发酵流程图: 1. **种子罐
小规模,优化条件,让菌种“热身”,适应环境。 2. 发酵罐(扩大培养):大规模,连续补料(Fed-batch)。 - 关键点:为什么不能一次性加满所有碳氮源? - 解释:高浓度碳源(如高浓度葡萄糖)可能导致“分解代谢物阻遏”;高浓度氮源可能改变pH。 - 策略:根据碳氮的存在形式和消耗速率,动态调整补料策略,既保证营养充足,又避免毒性,实现真正的“扩大”。
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练一道
基础题
某实验室需用大肠杆菌生产某种酶。初始培养基含 1% 葡萄糖和 0.5% 蛋白胨。若要将菌体密度从 $10^6$ CFU/mL 扩大至 $10^9$ CFU/mL,以下哪种调整最合理? A. 将葡萄糖浓度提升至 10% B. 将蛋白胨替换为高浓度硫酸铵,并维持葡萄糖在 1-2% C. 同时大幅增加葡萄糖和蛋白胨浓度 D. 仅增加培养温度
变式
在扩大培养酵母菌生产酒精时,发现后期菌体生长停滞,但残糖量仍较高。已知酵母菌偏好利用葡萄糖而非乙醇。请分析原因并提出改进措施。
试试手自己判
检测题
在扩大培养枯草芽孢杆菌时,若将培养基中的铵态氮(NH4+)替换为硝态氮(NO3-),发现菌体生长速率下降。请从“氮的存在形式”角度解释原因,并说明如何调整以恢复生长速率。
看答案和判分标准
答案:- 原因:枯草芽孢杆菌利用硝态氮需先将其还原为铵态氮,此过程消耗能量(ATP)和还原力(NADH),且涉及多步酶促反应,代谢负担重,导致生长速率下降。铵态氮可直接被同化,代谢效率高。 - 调整: 1. 改回使用铵态氮(如硫酸铵)作为主要氮源。 2. 若必须使用硝态氮,需延长适应期,或添加辅助因子(如维生素B12)以促进还原酶活性,但效率仍低于铵态氮。
判对标准:
- 指出硝态氮需还原,消耗能量(2分)。
- 指出铵态氮可直接利用,效率高(2分)。
- 提出改回铵态氮或优化还原条件(1分)。
- 逻辑清晰,术语准确(1分)。
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